GPCR19激动剂（TGR5 Receptor Agonist）操作规程

1. 细胞培养
在96孔板中，每孔加入100μL细胞悬液。对于细胞增殖实验，建议每孔加入2000个细胞（100μL），对于细胞毒性实验，则需每孔加入5000至10000个细胞（具体数量应根据细胞的大小和增殖速度等因素进行调整）。将96孔板置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养24小时。

2. 加入受试化合物
向每孔中添加适当浓度的受试化合物，量为0至10μL。

3. 孵育
将96孔板放回37℃、5% CO2，湿度为100%的细胞培养箱中，孵育合适的时间，以确保化合物的充分反应。

4. 配制MTT溶液
将5× MTT用稀释液稀释成1× MTT溶液，以备后续使用。

5. MTT反应
每孔加入50μL的1× MTT溶液，在37℃下孵育4小时，使MTT被细胞还原生成甲臜。

6. 终止反应
轻轻吸去上清液，每孔加入150μL DMSO以溶解甲臜，并用平板摇床摇匀。

7. 光密度检测
使用酶标仪在570nm波长下检测每孔的光密度（如没有570nm滤光片，可使用560-600nm的滤光片进行检测）。

8. 结果分析
a. 细胞存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值（如培养基加MTT，无细胞），或空白药物孔的OD值（如培养基加不同稀释度的受试药物加MTT，无细胞）。计算各重复孔的OD值平均数±SD。细胞存活率以T/C%表示，其中T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。细胞存活率%＝（加药细胞OD/对照细胞OD）×100。
b. 药物浓度计算：求出T/C=50%时的药物浓度（IC50）及T/C=10%时的药物浓度（IC90）。

通过这一系列标准化的操作规程，研究人员可以有效评估918博天娱乐官网旗下GPCR19激动剂的生物活性及其对细胞的影响。这些实验结果对于进一步开发和优化相关药物具有重要意义。